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蛙心灌流实验

日期: 2019-05-06
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来源:

实验目的:

1、学习斯氏或八木氏离体蛙心灌流法。

2、了解心肌的生理特性。

3、观察 Na+、K+、Ca2+及肾上腺素(Adr)、乙酰胆碱(Ach)等对离体心脏活动的影响。

蛙心灌流实验

实验原理:

动物的离体心脏,用理化特性类似于其血浆的代体液灌流时,在一定的时间内,仍然保 持有节律的舒张活动。改变灌流液的理化特性,这种节律的舒缩活动也随之发生改变,说明 内环境理化因素的相对恒定是维持心脏正常节律活动的必要条件.

实验材料与用品:

1、材料:蟾蜍、斯氏蛙心套管、套管夹、支架、双凹夹、蛙心夹、蛙板(蜡盘)、常用手术 器械、滴管、废液缸、棉线

2、药品:任氏液、0.65%NaCl、2%CaCl2 、1%KCl、0.01% 肾上腺素、0.01%乙酰胆碱

3、仪器:计算机采集系统、张力传感器

蛙心灌流实验

实验步骤:

1、取一只蟾蜍,用探针破坏其脑脊髓后仰卧固定于蛙板上,剪开胸前区皮肤,剪去胸骨, 暴露心脏。用眼科镊提起心包膜,再用眼科剪在心脏收缩时将其剪破,使心脏完全暴露出来。

2、识别心脏的各个部分,包括心房、心室、静脉窦等,并观察心跳。

3、插蛙心插管,制备离体蛙心。在左主动脉下穿一线结扎,靠近动脉窦,接着在左右主动 脉下方穿一线,并打一松结留作固定插管用。

4、用手提起结扎线,用眼科剪在左侧主动脉距分叉 3mm 处向心脏剪一斜口,右手将盛有 少量任氏液的蛙心插管由此口插入,先进入动脉圆锥,然后在心室收缩时,向前略向左推动 蛙心插管,使之经主动脉瓣插入心室腔内(注意:为了使蛙心插管顺利插入心室,应使心室 与动脉圆锥成一条直线)。进入心室的标志是随着心室搏动,均有血液喷入插管,插管的液 面随着心搏而升降。结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上,以防止标本滑脱。在蛙 心插管插入心室后,用吸管及时吸出管内的血液,更换新鲜任氏液。提起插管,剪断主动脉 左、右侧分支,轻轻提起插管和心脏,在静脉窦下方绕一线,将左右肺静脉及前后腔静脉一 起结扎(切勿损伤静脉窦),在结扎线下方剪去所有牵连的组织,将心脏摘出。用任氏液反 复冲洗(10~25 滴/min 的速度缓慢点滴)任氏液。至插管内任氏液完全澄清无色为止。以后 做实验注意每次换液时,插管内液面应保持相同的高度。

5、连接多道生理记录仪

①用夹子将蛙心插管固定于铁架台上,肌张力换能器固定于蛙心下方,通过蛙心夹与线将离 体蛙心与张力换能器相连(蛙心夹于心室舒张时夹住心尖)。

②开动多道生理记录仪观察曲线。

6、观察内容

①描记正常心搏曲线: 曲线疏密——代表心跳的频率; 曲线的规律性——代表心跳节律性; 曲线的幅度——代表心室收缩的强弱 曲线的顶点水平——代表心室收缩的程度; 曲线的基线——代表心室舒张的程度。

②加入 2%Ca Cl2 溶液 1~2 滴,混匀,观察曲线变化。

③加入 1%KCl 溶液 1~2 滴,混匀,观察曲线变化。

④加入 1/10000Ad 溶液 1~2 滴,混匀,观察曲线变化,待效应明显后,将灌流液全部吸出, 换入新鲜任氏液,使心跳恢复正常。

⑤加入 1/100000Ach 溶液 1~2 滴,混匀,观察曲线变化,待效应明显后,将灌流液全部吸出, 换入新鲜任氏液(如果加入 Ach 后心跳已停止舒张状态,换液后,可用滴管插至插管底部, 将灌流液剂入心室,反复数次,将心室内 Ach 完全清洗出)。

注意事项:

1、用眼科镊提起心包膜,再用眼科剪在心脏收缩时将其剪破,使心脏完全暴露出来。

2、未结扎剪断血管会造成大出血,是严重错误操作;未结扎便插入插管同理。

3、为了使蛙心插管顺利插入心室,应使心室与动脉圆锥成一条直线。

4、进入心室的标志是随着心室搏动,均有血液喷入插管

5、在蛙心插管插入心室后,用吸管及时吸出管内的血液,更换新鲜任氏液

蛙心灌流实验

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